20 research outputs found

    Caracterizaci贸n de las comunidades bacterianas de los Octocorales Eunicea sp., y Pseudopterogorgia elisabethae

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    Los compuestos inhibidores de Quorum Sensing suelen presentar actividad antifouling y antipatog茅nica y se han encontrado en organismos marinos libres de macrofouling, pero han sido poco estudiados en la comunidad bacteriana asociada con 茅stos. En este trabajo se estudi贸 la comunidad bacteriana asociada con los octocorales Eunicea sp., y Pseudopterogorgia elisabethae (organismos libres de macrofouling) por pirosecuenciaci贸n e hibridizaci贸n fluorescente in situ (FISH), encontrando que la mayor铆a de bacterias corresponden a la clase Gamma-proteobacteria y en menor proporci贸n est谩n Beta y Alfa-proteobacteria. Se evaluaron algunas relaciones ecol贸gicas dentro de la comunidad de Eunicea sp., como la actividad inhibidora de Quorum Sensing y el antagonismo, encontr谩ndolas en algunos aislamientos bacterianos. Estos aislamientos podr铆an estar ejerciendo un el control en la composici贸n y la estructura de la comunidad bacteriana que mantiene a este octocoral libre de macrofouling. / Abstract. Quorum Sensing inhibitor compounds usually have antifouling and antipathogenic activities and have been found in marine organisms free of macrofouling. These compounds have been poorly researched in the bacterial community associated to these organisms. In this work, the bacterial communities from the octocorals Eunicea sp., and Pseudopterogorgia elisabethae were studied by pyrosequencing and fluorescent in situ hybridization (FISH), finding that bacteria are mostly from Gamma-proteobacteria class and in lower proportion, Alpha and Beta-proteobacteria. Also, different ecologic relationships in the bacterial communities of Eunicea sp., as Quorum Sensing inhibition and antagonism were studied and found in bacterial isolations. These isolates might play a fundamental role in controlling bacterial community structure, which results in a soft coral surface free of macrofouling development.Maestr铆

    Desarrollo de sistemas de expresi贸n para an谩lisis metagen贸micos funcionales e identificaci贸n de enzimas de inter茅s

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    Programa Oficial de Postgrado en Biotecnolog铆aLa metagen贸mica es una disciplina que permite el estudio de los microorganismos a partir de su material gen茅tico, sin necesidad de cultivo previo. Presenta un potencial enorme de acceso a la gran fuente de recursos que supone la diversidad microbiana, debido a que m谩s del 99 % de los microorganismos no son susceptibles de ser cultivados en condiciones de laboratorio.El material gen茅tico extra铆do de una muestra ambiental se clona en los vectores adecuados y se introduce en las bacterias hospedadoras seleccionadas, constituyendo las metagenotecas. Con ellas se pueden realizar an谩lisis basados en secuencia, buscando secuencias que presenten homolog铆a con otras ya conocidas, y an谩lisis basados en funci贸n, que permiten la detecci贸n de enzimas incluso completamente novedosas en clones que presentan un determinado fenotipo, seguido de la identificaci贸n posterior de los genes responsables. La principal limitaci贸n de la metagen贸mica funcional es la dificultad de la expresi贸n del ADN metagen贸mico en hospedadores heter贸logos.Para ello, en esta tesis se han desarrollado nuevos sistemas constituidos por vectores para la construcci贸n de metagenotecas y bacterias especializadas para la realizaci贸n de los rastreos, que conjuntamente permiten la inducci贸n de la transcripci贸n desde promotores heter贸logos y la antiterminaci贸n de la misma, combinando elementos v铆ricos y bacterianos. Uno de los sistemas est谩 basado en la transcripci贸n por la ARN polimerasa del fago T7, y el otro, en la transcripci贸n por la ARN polimerasa bacteriana desde el promotor inducible por salicilato psal acoplado al sistema de antiterminaci贸n de la prote铆na N del fago lambda. Aprovechando el nuevo sistema se han construido dos metagenotecas de suelos contaminados y se han realizado con 茅xito b煤squedas de distintas actividades de inter茅s, como son la resistencia al antibi贸tico carbenicilina, oxigenasa hidroxilante de anillos arom谩ticos, dioxigenasa extradi贸lica, endoglucanasa y 13-glucosidasa. Por 煤ltimo, se han caracterizado clones portadores de algunas de estas actividades. Se puede destacar la identificaci贸n de una bomba de eflujo capaz de conferir resistencia a carbenicilina por s铆 misma, una gran cantidad de dioxigenasas extradi贸licas muy diversas que han permitido el establecimiento de seis nuevas subfamilias y distintas monooxigenasas hidroxilantes. Algunas de estas 煤ltimas enzimas, forman parte de la ruta de desulfuraci贸n de dibenzotiofeno, que ha sido estudiada en m谩s detalle.Universidad Pablo de Olavide. Departamento de Biolog铆a Molecular e Ingenier铆a Bioqu铆mic

    Caracterizaci贸n de la histidina quinasa CbrA del sistema de dos componentes CbrAB de pseudomonas putida

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    Programa de Doctorado en Biotecnolog铆a, Ingenier铆a y Tecnolog铆a Qu铆micaL铆nea de Investigaci贸n: Regulaci贸n G茅nica y Sistemas de Expresi贸n en BacteriasClave Programa: DBIC贸digo L铆nea: 26El sistema de dos componentes CbrAB, exclusivo de algunos g茅neros de la familia Pseudomonadaceae, constituye un sistema de control global del metabolismo bacteriano que integra la asimilaci贸n jer谩rquica de diversas fuentes de carbono como los amino谩cidos arginina, histidina y prolina (Amador et al., 2010; Li & Lu, 2007; Nishijyo et al., 2001; Zhang et al., 2015; Zhang & Rainey, 2008) y otros procesos fisiol贸gicos como tolerancia a estr茅s (Amador et al., 2010). La histidina quinasa CbrA es un elemento clave en la detecci贸n de la se帽al activadora y en la auto-transfosforilaci贸n del elemento de respuesta, CbrB. CbrA est谩 codificado por el gen cbrA que se encuentra aguas abajo de una pauta abierta de lectura conservada que hemos denominado cbrX. En esta Tesis se ha descrito el papel de CbrX en la expresi贸n de CbrA y mostramos que existe un acoplamiento traduccional entre ambos genes. Adem谩s, se ha caracterizado el papel de los dominios transmembranas (TM) y dominio PAS de CbrA en la detecci贸n de la se帽al. Un mutante carente de los dominios TM (CbrA-驴TM) manifiesta una deficiencia en su crecimiento en histidina y citrato como fuentes de carbono, pero su sobreexpresi贸n restaura la capacidad de crecer y responder a la disponibilidad de carbono, lo que sugiere que la naturaleza de la se帽al detectada es intracelular. Mediante una aproximaci贸n por fluorimetr铆a diferencial de barrido (DSF) se ha analizado qu茅 metabolitos podr铆an constituir una se帽al a la que el sistema regulador responda. Por otra parte, se ha estudiado el papel regulador del complejo Hfq/Crc sobre la expresi贸n de CbrA y genes diana de CbrB, como crcZ, crcY y PP2810 as铆 como la implicaci贸n del factor sigma extracitoplasm谩tico SigX en la compleja red reguladora del metabolismo del carbono.Universidad Pablo de Olavide de Sevilla. Departamento de Biolog铆a Molecular e Ingenier铆a Bioqu铆mic

    An谩lisis gen贸mico y funcional de los mecanismos de promoci贸n del crecimiento vegetal en Bradyrhizobium japonicum E109, la cepa m谩s utilizada para la formulaci贸n de inoculantes para soja en la Rep煤blica Argentina

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    En esta tesis se presentar谩n resultados del an谩lisis gen贸mico y funcional de Bradyrhizobium japonicum cepa E109, una de las cepas m谩s utilizadas en nuestro pa铆s para la formulaci贸n de inoculantes para soja. El genoma de esta bacteria contiene un 煤nico replic贸n de 9.224.208 pares de bases (9.2 Mpb). El an谩lisis post-secuenciaci贸n determin贸 la existencia de numerosas secuencias relacionadas con mecanismos de promoci贸n del crecimiento vegetal y otros relacionados con el estilo de vida rizosf茅rica de este microorganismo. Como uno de los mecanismos m谩s importante se destac贸 aquel relacionado con la producci贸n de fitohormonas y dentro de ellas el 谩cido indol-3-ac茅tico (AIA). El estudio del metabolismo y homeostasis del AIA y otras auxinas, determino que en B. japonicum E109 no es capaz de acumular concentraciones cuantificables de AIA aunque posea la informaci贸n gen茅tica para biosintetizar esta mol茅cula. E109 tiene capacidad de degradar, tanto auxinas naturales (AIA), como sint茅ticas (IBA y ANA), aunque la velocidad de degradaci贸n es mayor en el caso de las primeras. B. japonicum E109 tiene la capacidad de hidrolizar conjugados de AIA con amino谩cidos (AIA-amidas) o glucosa y degradar la hormona en una reacci贸n simult谩nea o posterior pero no es capaz de conjugar la hormona con amino谩cidos. La hidr贸lisis y el catabolismo de AIA y AIA-amidas, se realiza en cualquier fase de la curva de crecimiento bacteriana, pero la fase donde es m谩s r谩pida es la reacci贸n es la exponencial. Ensayos con la adici贸n ex贸gena de AIA a cultivos puro de E109 determinaron que la cepa es capaz de catabolizar r谩pidamente la hormona y este fen贸meno ocurri贸 de una forma no independiente a la presencia de la hormona (constitutiva). A trav茅s de un abordaje in s铆lico e in vitro, pudimos confirmar que la degradaci贸n de AIA es B. japonicum E109 depende de una 3-fenilpropionato dioxigenasa con dos sub-unidades y codificada por los genes iacC y iacD. El an谩lisis transcript贸mico obtenido por el catabolismo de AIA por E109, determin贸 que esta mol茅cula afecto su metabolismo de manera global y particularmente a nivel de ciertos mecanismos fisiol贸gicos relacionados con la capacidad de la bacteria para promover el crecimiento vegetal. El catabolismo de AIA indujo la sobreexpresi贸n de genes de la fijaci贸n de nitr贸geno y simbiosis, quimiotaxis y movilidad, y genes de la respuesta generalizada a estr茅s mientras que reprimi贸 la expresi贸n de genes de la bios铆ntesis de AIA.Fil: Torres, Daniela Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas; Argentin

    Caracterizaci贸n de la colonizaci贸n y promoci贸n del crecimiento vegetal por <i>Burkholderia tropica</i> en gram铆neas

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    Objetivo general Desarrollar metodolog铆as conducentes a la aplicaci贸n agron贸mica de bacterias diaz贸trofas end贸fitas promotoras del crecimiento vegetal como una nueva alternativa de inoculaci贸n en gram铆neas, particularmente cereales, que contribuya a la sustentabilidad econ贸mica y ambiental de estos cultivos, procurando un mejor aprovechamiento de los recursos naturales del suelo y del ambiente. Objetivos espec铆ficos 1. Evaluar algunas de las habilidades de B. tropica MTo-293 como colonizadora competente y como promotora del crecimiento vegetal: a- la formaci贸n biofilm y la producci贸n de enzimas l铆ticas b- la solubilizaci贸n de compuestos insolubles de f贸sforo. 2. Caracterizar el proceso de colonizaci贸n de B. tropica MTo-293 en plantas de trigo y sorgo despu茅s de inocular semillas de ambas gram铆neas, como primer requisito para poder expresar los posibles efectos ben茅ficos. 3. Evaluar aspectos pr谩cticos fundamentales para el posible uso de B. tropica MTo-293 como inoculante: a- viabilidad bacteriana en formulaciones l铆quidas y sobre la superficie de las semillas; b- compatibilidad con agroqu铆micos. 4. Evaluar el efecto promotor de B. tropica MTo-293 en ambos cereales en ensayos a campo. 5. Realizar la b煤squeda de genes de B. tropica MTo-293 relacionados con la rizocompetencia y la promoci贸n del crecimiento vegetal.Facultad de Ciencias Exacta

    Evolution towards pathogenicity: Comparative analysis between Brucella and a recently isolated Pseudochrobactrum

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    P贸ster presentado Online en el XXVIII Congreso Nacional de Microbiolog铆a 28 de junio al 2 de julio, 2021 .- https://hal.inrae.fr/hal-03337244/documentLa brucelosis es una de las zoonosis bacterianas m谩s ampliamente distribuidas en el mundo, contribuyendo de forma importante a la pobreza de muchos pa铆ses en desarrollo. Ninguna de las vacunas actuales proporciona una protecci贸n completa, son virulentas para humanos e interfieren en el diagn贸stico serol贸gico. Por ello, para mejorar las vacunas actuales, es imprescindible seguirestudiando los mecanismos de virulencia de Brucella, el agente etiol贸gico de la brucelosis. 脡sta pertenece a las 伪-2 Proteobacteria, grupo que incluye desde bacterias ambientales hasta bacterias que han evolucionado a pat贸genos animales dif铆cilmente detectados por el sistema inmune, como es el caso de Brucella. Para estudiar la evoluci贸n que se ha dado hacia la patogenicidad en esta familia y poder determinar mejor as铆 los factores de virulencia de Brucella, es interesante comparar bacterias filogen茅ticamente pr贸ximas que son biol贸gicamente diferentes. Por primera vez, se han aislado bacterias del g茅nero Pseudochrobactrum en un hu茅sped natural de Brucella.Pseudochrobactrum es un g茅nero filogen茅ticamente cercano a Brucella que, hasta la fecha, s贸lo incluye bacterias ambientales. En este trabajo se han caracterizado estos nuevos aislamientos y teniendo en cuenta sus propiedades fisiol贸gicas, su perfil de l铆pidos polares y 谩cidos grasos, y el an谩lisis filogen茅tico, se ha propuesto una nueva especie con el nombre de Pseudochrobactrum bovis. Los estudios comparativos con Brucella han revelado diferencias en la composici贸n de la envoltura celular, el contenido gen茅tico y virulencia. Por ello, P. bovis puede representar un nuevo modelo para estudiar la evoluci贸n de Brucella hacia la virulenciaN

    Taxogen贸mica en Rhodobacteraceae

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    La familia Rhodobacteraceae es una de las principales subdivisiones de la clase Alphaproteobacteria, que comprende en ocasiones m谩s del 25% de la comunidad bacteriana total de las aguas superficiales oce谩nicas. La mayor铆a de las especies pertenecientes a esta familia son de origen marino y presentan una elevada diversidad fenot铆pica. El objetivo principal de esta Tesis Doctoral ha sido ampliar nuestro conocimiento sobre los miembros de esta familia mediante el estudio de sus genomas y esclarecer las relaciones taxon贸micas entre los mismos utilizando como base el an谩lisis filogen贸mico de dichos genomas, as铆 como los 铆ndices de semejanza gen贸mica apropiados a tal efecto. Para ello se ha procedido a realizar la secuenciaci贸n gen贸mica de novo, ensamblado, anotaci贸n y dep贸sito de 36 cepas tipo pertenecientes a Rhodobacteraceae cuyos genomas no se encontraban disponibles en las bases de datos p煤blicas de genomas, ensamblados o lecturas gen贸micas. El objetivo general se ha desglosado en los siguientes objetivos espec铆ficos: I) Realizar una inferencia fenot铆pica mediante el an谩lisis gen贸mico de cada uno de los genomas secuenciados; II) Confirmar, en la medida que sea posible, los rasgos inferidos mediante experimentaci贸n con las cepas correspondientes; y III) Llevar a cabo una exploraci贸n filogen贸mica y revisi贸n taxon贸mica de la familia Rhodobacteraceae. Este estudio ha permitido depositar las secuencias gen贸micas de 36 cepas tipo pertenecientes a Rhodobacteraceae cuyos genomas no hab铆an sido secuenciados hasta el momento lo que ha contribuido a reducir el sesgo de secuenciaci贸n existente en las bases de datos p煤blicas. Asimismo, la exploraci贸n de los genomas secuenciados y anotados ha posibilitado realizar una amplia inferencia fenot铆pica que ha abarcado el estudio de la organizaci贸n y contenido del genoma, el metabolismo de carbohidratos, estrategias para la producci贸n alternativa de energ铆a, el metabolismo del nitr贸geno, f贸sforo, hierro y compuestos C1, la degradaci贸n de compuestos arom谩ticos, la capacidad de adherencia y producci贸n de biopel铆culas, la movilidad flagelar y quimiotaxis, la producci贸n de sustancias antimicrobianas y la resistencia frente a compuestos t贸xicos o condiciones fisicoqu铆micas adversas. Por 煤ltimo, este trabajo representa el estudio taxon贸mico m谩s amplio efectuado hasta el momento en la familia Rhodobacteraceae mediante la aplicaci贸n de un enfoque taxogen贸mico que ha podido solventar parte de la problem谩tica existente entre la filogenia y sistem谩tica de este linaje. De este modo, el an谩lisis filogen贸mico realizado en este estudio junto con los 铆ndices de semejanza gen贸mica calculados ha permitido la descripci贸n formal de una sinonimia a nivel de especie y 30 reclasificaciones a nivel de g茅nero, as铆 como tambi茅n, afinar el rango de corte propuesto para la circunscripci贸n de g茅neros dentro de la familia Rhodobacteraceae

    Evaluaci贸n de tres aislamientos bacterianos como potenciales promotores de crecimiento vegetal en plantas de arroz (Oryza sativa)

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    El uso de biofertilizantes y biocontroladores en cultivos de alto impacto econ贸mico como el arroz, buscan fortalecer las t茅cnicas de fertilizaci贸n y control de enfermedades en los procesos de producci贸n de los cultivos y han sido aceptados como alternativas al manejo qu铆mico tradicional. La presente investigaci贸n evalu贸 el potencial de las cepas bacterianas A20, 5.1 y 7.1, como promotores de crecimiento vegetal en dos variedades colombianas de arroz (F60 y F733) con el objetivo de contribuir en el desarrollo de un bioinoculante dirigido al sector arrocero. Los tres aislamientos fueron clasificados dentro del g茅nero Streptomyces por medio del secuenciamiento del gen 16S rARN. Para evaluar el potencial de los tres microorganismos como promotores de crecimiento vegetal se llevaron a cabo diferentes ensayos que pusieron de manifiesto la capacidad de estas cepas de producir sider贸foros, AIA, enzimas extracelulares, solubilizar fosfatos (7.1) y controlar el crecimiento de un amplio rango de microorganismos pat贸genos in vitro. Adicionalmente, se verific贸 la capacidad de colonizaci贸n de los tres aislamientos destacando la eficiente colonizaci贸n de A20 y 7.1 en suelo rizosf茅rico y en el rizoplano de las dos variedades de arroz evaluadas. Ambos aislamientos demostraron tener la capacidad de colonizar la end贸sfera de la ra铆z de las plantas de arroz bajo condiciones gnotobi贸ticas. Los ensayos de promoci贸n de crecimiento in vivo permitieron establecer que A20 y 7.1 poseen el potencial de promover el crecimiento de las plantas inoculadas en Hoagland y suelo en condiciones de invernadero. Teniendo en cuenta estos resultados, se propone a los aislamientos A20 y 7.1 como cepas promisorias para el desarrollo de un inoculante con caracter铆sticas de biofertilizante (A20 y 7.1) y biocontrolador (A20). El aislamiento 5.1 que no present贸 ninguna influencia sobre el crecimiento de las plantas de arroz tratadas, demostr贸 en los ensayos in vitro un potencial interesante como biocontrolador, por ello se sugiere continuar su estudio en este campo.Abstract. The use of biofertilizers and biocontrol agents in high economic impact crops like rice, seeking to strengthen fertilization techniques and disease control in production processes of crops and have been accepted as alternatives to traditional chemical management. The present study evaluated the potential of bacterial strains A20, 5.1 and 7.1, as promoters of plant growth in two Colombian rice cultivars ( F60 and F733 ) with the aim of contributing to the development of a bacterial inoculant for the rice sector. The three isolates were classified within the genus Streptomyces by sequencing of the 16S rRNA gene. In vitro assays were conducted to evaluate the potential of the three microorganisms as plant growth promoters. These assays demostrsted the ability of these strains to produce siderophores, AIA, extracellular enzymes, solubilizing phosphate (7.1) and controlling the growth of a wide range of pathogenic microorganisms. Additionally, colonization ability of the three isolates was evaluated. The efficient colonization of A20 and 7.1 in rhizosphere soil and the rhizoplane of the two rice cultivars were verified. Both isolates were shown to have the ability to colonize the root endosphere under gnotobiotic conditions. In vivo assays confirm that A20 and 7.1 have the potential to promote the growth of inoculated plants in Hoagland and soil under greenhouse conditions. With these results, it is proposed that A20 and 7.1 isolates are promising strains for the development of a biofertilizer inoculant (A20 and 7.1) and biocontrol agents (A20). Isolation 5.1 that had no influence on the growth of rice plants treated demonstrated in in vitro tests an interesting potential of biocontrol therefore is suggested to continue their study in this field.Maestr铆

    Aislamiento e identificaci贸n de compuestos de Parthenium incanum y Nothoscordum bivalve con actividad biol贸gica.

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    Se aislaron e identificaron compuestos con actividad antimicrobiana en contra de una cepa farmacorresistente de Acinetobacter baumannii, esto a partir de extractos biol贸gicamente activos de Parthenium incanum y Nothoscordum bivalve. Para ello, se llevaron a cabo diferentes extracciones del material vegetal, obteniendo 4 diferentes extractos por planta. En la actividad antimicrobiana preliminar, s贸lo los extracto metan贸licos mostraron efecto. En la obtenci贸n de la CMB, se registraron valores de entre 7.50卤0.54 y 8.50卤0.54 mg/mL. Para la letalidad por Artemia salina, se observ贸 que los extractos presentaron una DL50 de entre 380 y 1882 ppm. En la citotoxicidad preliminar, los extractos causaron entre el 0 y el 92.98% de hem贸lisis. En la protecci贸n de los eritrocitos frente al radical AAPH, los extractos registraron una citoprotecci贸n de hasta 94.58%. Con respecto a la captura de radicales, se obtuvieron valores de entre 275.55卤21 y 598.99卤4 碌moles quivalentes de Trolox/g de extracto. Para los Fenoles Totales Solubles se determinaron valores de entre 1.35卤0.07 y 4.13卤0.04 g equivalentes de 谩cido g谩lico por cada 100 g de extracto. A los extractos de menor letalidad y citotoxicidad, se les determin贸 el efecto de las concentraciones sub-letales de las CMB麓s, sobre el crecimiento en A. baumannii, demostrando que est谩s no afectaban el crecimiento, pero si la formaci贸n de su biopel铆culas hasta un 41.62%; por otro lado, se estudi贸 la actividad coagulante, determinado que el extracto de P. incanum afect贸 el TP de manera significativa (p<0.05). En el extracto seleccionado de N. bivalve, se evalu贸 su efecto sobre la expresi贸n g茅nica de la biopel铆cula en A. baumanni y se realiz贸 un an谩lisis por MEB; determinando que el extracto afect贸 la expresi贸n de los genes abaI, bap y csuE, causando una sobreexpresi贸n de 15.4 veces, as铆 mismo, al observar la por microscopia se logr贸 apreciar un da帽o en la estabilidad y formaci贸n de su biopel铆cula. As铆 mismo, se le evalu贸 su citotoxicidad con c茅lulas normales Pbmc麓s, encontrando que hasta 500 ppm no causaba da帽o en su proliferaci贸n celular. Estudios de la inhibici贸n de la enzima 伪-glucosidasa mostr贸 que el extracto posee una CI50 de 1393卤13 ppm y su capacidad antiurol铆tica mostr贸 un valor de CI50 de 1141卤30 ppm. En el caso de P. incanum se aislaron e identificaron la partenina y la coronopolina. Para N. bivalve se identificaron de manera parcial amidas o aminas por FT-IR del extracto sometido a todas las evaluaciones biol贸gicas antes mencionadas. ABSTRACT They were isolated and identified compounds with antimicrobial activity against a drugresistant strain of Acinetobacter baumannii, this from biologically active extracts of Parthenium incanum and Nothoscordum bivalve. To do this, different extractions of the plant material were carried out, obtaining 4 different extracts per plant. In the preliminary antimicrobial activity, only the methanolic extract showed effect. In obtaining the CMB, values between 7.50卤0.54 and 8.50卤0.54 mg/mL were recorded. For lethality by Artemia salina, it was observed that the extracts presented an LD50 of between 380 and 1882 ppm. In the preliminary cytotoxicity, the extracts caused between 0 and 92.98% of hemolysis. Protection of erythrocytes against the radical AAPH, the extracts registered a cytoprotection of up to 94.58%. With respect to the capture of radicals, values of between 275.55卤21 and 598.9位卤4 葷mol of quivalent Trolox/g extract were obtained. For Total Phenols Soluble, values between 1.35卤0.07 and 4.13卤0.04 g gallic acid equivalent per 100 g of extract were determined. To the extracts of lower lethality and cytotoxicity, the effect of the sub-lethal concentrations of the CMB's, on the growth in A. baumannii was determined, showing that they were not affecting the growth, but the formation of their biofilms until 41.62%. On the other hand, the coagulant activity was studied, determined that the extract of P. incanum affected TP significantly (p <0.05). In the selected extract of N. bivalve, its effect on the gene expression of the biofilm in A. baumanni was evaluated and an analysis was performed by SEM; determining that the extract affected the expression of the genes abaI, bap and csuE, causing an overexpression of 15.4 times, likewise, when observing the microscopy it was possible to appreciate a damage in the stability and formation of its biofilm. Likewise, its cytotoxicity was evaluated with normal Pbmc's cells, finding that up to 500 ppm did not cause damage in its cellular proliferation. Studies of the inhibition of the enzyme 伪-glucosidase showed that the extract has an IC50 of 1393卤13 ppm and its anti-urolithic capacity showed an IC50 value of 1141卤30 ppm. In the case of P. incanum, parthenin and coronopolin were isolated and identified. For N. bivalve, amides or amines were partially identified by FT-IR of the extract subjected to all the aforementioned biological evaluations

    Adaptaci贸n de Azoarcus sp. CIB a diferentes condiciones ambientales

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    Tesis Doctoral in茅dita le铆ada en la Universidad Aut贸noma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biolog铆a. Fecha de lectura: 14-06-2018Las bacterias del g茅nero Azoarcus descritas hasta la fecha pueden clasificarse en dos grupos ecofisiol贸gicos bien diferenciados, por un lado, bacterias con capacidad para establecerse como end贸fitos de plantas y, por otro lado, bacterias capaces de degradar anaer贸bicamente una gran variedad de compuestos arom谩ticos. En esta Tesis Doctoral se ha utilizado como modelo de estudio la bacteria Azoarcus sp. CIB, una cepa anaer贸bica facultativa que ha sido ampliamente utilizada para el estudio del catabolismo anaer贸bico de compuestos arom谩ticos. Se ha demostrado por primera vez la capacidad de una bacteria del g茅nero Azoarcus perteneciente al subgrupo de degradadores anaer贸bicos de compuestos arom谩ticos para establecerse como end贸fito de arroz y se han estudiado las propiedades que posee Azoarcus sp. CIB para promover el crecimiento de la planta. Adem谩s, se ha demostrado el papel de los pili tipo IV, el flagelo y el exopolisac谩rido en la colonizaci贸n del arroz, y se han implementado las propiedades beneficiosas de la cepa CIB mediante la construcci贸n de una cepa recombinante con actividad ACC desaminasa. Con el fin de entender los mecanismos moleculares implicados en el estilo de vida endof铆tico, se ha realizado un an谩lisis transcript贸mico global frente a extractos de ra铆z de arroz y se ha abordado el papel regulador que puede tener el di-GMPc en la interacci贸n plantaend贸fito. Por otro lado, en esta Tesis tambi茅n se ha investigado la adaptaci贸n de Azoarcus sp. CIB a otras condiciones ambientales que no hab铆an sido estudiadas anteriormente y que revelan la gran versatilidad metab贸lica de esta bacteria. As铆, se han abordado algunos de los mecanismos de resistencia a metales pesados (cadmio, n铆quel, zinc) y metaloides (selenito, telurito, arseniato y arsenito), que no hab铆an sido previamente caracterizados en ninguna cepa del g茅nero Azoarcus. Un aspecto de gran relevancia biotecnol贸gica ha sido el estudio de la capacidad de acoplar la resistencia a selenito y telurito a la formaci贸n de nanopart铆culas. Finalmente, se ha confirmado que la cepa CIB es capaz de resistir arseniato (genes ars) y de utilizar arsenito como fuente adicional de energ铆a en condiciones anaer贸bicas, caracteriz谩ndose el primer cluster arx, que codifica una arsenito oxidasa anaer贸bica, en un organismo heter贸trofo y que tambi茅n est谩 implicada en la resistencia al arsenito.The genus Azoarcus harbors a high diversity of bacteria that have been classified in two different ecophysiological groups: on one hand, a group of bacteria that can live as plant endophytes and, on the other hand, a group of bacteria specialized in the anaerobic degradation of a wide range of aromatic compounds. In this thesis, we have used Azoarcus sp. CIB, a facultative anaerobe studied by its ability to degrade aromatic compounds anaerobically, as a model. For the first time, this work proves the ability to develop an endophytic lifestyle of an Azoarcus strain belonging to the specialized group of aromatic compounds degraders in anoxic conditions and its plant growth promotion properties has been characterized. Furthermore, the role of type IV pili, flagella and exopolysaccharide during plant colonization has been elucidated and its plant beneficial properties has been improved by the construction of a recombinant strain with ACC deaminase activity. A global transcriptomic approach in response to rice root extracts has been also carried out in order to understand the molecular mechanisms involved in the endophytic lifestyle and the role of the global regulator c-di-GMP during plant-endophyte interaction has been addressed. On the other hand, in this thesis has also been investigated the adaptation of Azoarcus sp. CIB to environmental conditions that have never been studied before and that confirms the high metabolic versatility of this strain. Thus, the resistance to some heavy metals (cadmium, nickel, zinc) and metalloids (selenite, tellurite, arsenate and arsenite) has been determined representing the first report about heavy metal and metalloid resistance in a strain of the genus Azoarcus. In this sense, the fact that selenite and tellurite resistance is couple to nanoparticles formation have also a great biotechnological interest. Finally, it has been demonstrated that Azoarcus sp. CIB is able to resist arsenate (ars genes) and to use arsenite as supplementary energy source, under anaerobic conditions, and the putative arx cluster, coding the anaerobic arsenite oxidase, has been characterized for the first time in a heterotrophic strain, being related with the use of arsenite as energy source and in arsenite resistance.La investigaci贸n ha sido financiada mediante los proyectos BIO2012-39501 y BIO2016-79736
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